摘要:本论文通过从土壤中分离菌落，土壤稀释法获得单菌落，再通过鉴别培养基，根据透明水解圈大小，判断产酶情况，获得产酶较高菌株NP28和SP1。通过PCR方法获得序列，送到上海生工生物公司测序，将序列进行拼接，获得全序列，对菌株进行初步分类。将菌株的16S rDNA序列提交到美国国立生物信息中心（NCBI），菌株登录号分别是NP28（FJ527481）和SP1（FJ908094）。分析其16S rDNA序列的同源性，对菌株进行鉴定，确定NP28是Klebsiella sp.，SP1是 Enterobacteriaceae sp.。
关键词: 酸性蛋白酶；细菌；16S rDNA；Klebsiella；Enterobacteriaceae
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 酸性蛋白酶的研究和应用-1
1.1.1酸性蛋白酶的理化性质及分离方法-1
1.1.2 酸性蛋白酶的酶学性质-1
1.1.3 酸性蛋白酶的作用机理-2
1.1.4 酸性蛋白酶的应用-2
1.2 酸性蛋白酶的应用前景-4
2 实验材料和方法-5
2.1 实验材料-5
2.1.1 菌株-5
2.1.2 药品-5
2.1.3主要仪器设备-6
2.2 实验方法-6
2.2.1 培养基的配制-6
2.2.1.1 LB固体培养基配制-6
2.2.1.2 配制方法注意事项-7
2.2.2 高压灭菌及操作台的消毒-7
2.2.2.1 仪器介绍-7
2.2.2.2 灭菌步骤-7
2.2.3.1 菌株的保藏-8
2.2.3.2 菌种的活化-8
2.2.4 透明圈法筛选-9
2.2.4.1 透明圈的原理-9
2.2.4.2 实验注意要点-9
2.2.4.3 实验具体操作步骤-9
2.2.5 进行PCR扩增16SrDNA-9
2.2.6 利用16S rDNA序列进行鉴定-10
3 结果与讨论-12
3.1 实验结果-12
3.1.1 筛选到耐酸性产蛋白酶活性较高菌株-12
3.1.2 16S rDNA序列的测定和分类分析-13
3.2 讨论-14
3.2.1 基因组DNA的提取-14
3.2.2 产酶菌株的分析-14
结论-16
致谢-17
参考文献-18
